Lab

CIANOTOX-Lab es el primer kit de cuantificación de microcistinas totales totalmente desarrollado y producido en el país. Permite determinar la concentración total de microcistinas en hasta 24 muestras en solo 120 min.

Principio del ensayo

CIANOTOX-Lab se basa en que las microcistinas inhiben la actividad de la Protein Fosfatasa 1 (PP1). La PP1 es suministrada en una microplaca de 96 wells junto con un sustrato que luego de reaccionar con la fosfatasa produce un color amarillo. La presencia de microcistinas produce la reducción de la intensidad de color producido de forma proporcional a su concentración. Esta inhibición es equivalente al mecanismo de toxicidad de las microcistinas, independientemente de su estructura química. Por lo tanto, el resultado de CIANTOX-Lab será la mejor aproximación al potencial tóxico de la muestra evaluada.

Procedimiento

Una alícuota de la muestra a analizar (2mL) debe ser calentada a 95°C por 20 min para liberar la totalidad de las microcistinas. Se separa el debris por centrifugación y los sobrenadantes quedan en condiciones de ser analizados la placa de CIANOTOX.

Datos Técnicos

Formato

Cantidad de determinaciones

Límite de detección (LOD)

Rango Lineal

Tiempo total de análisis

Duración en freezer

Duracion a temp. ambiente

Requerimientos:

Componentes incluídos

Placa de 96 wells. Proteina liofilizada y sellada al vacío.

Hasta 24 determinaciones

A partir de 0.4 ug/L

de 0.4 ug/L a 5 ug/L

120 minutos

Hasta 3 meses

Hasta 2 meses

Lector de placas multiwell con filtro de 405 nm
Set de micropipetas (p200, p1000)
Ambiente termostatizado a 37°C (Estufa, incubador orbital o lector de placas con termostato)
Baño térmico (seco o húmedo) de 95°C
Centrífuga
Recomendable: micropipeta multicanal p200

1. Microplaca de 96 wells. 90 pocillos con PP1 liofilizada y 6 pocillos blanco.
2. Curva de calibración: 0; 0,4; 0,6; 1,0; 2,5; 5,0 ppb
3. Control interno: 0,8 ± 0,22 ppb como control de calidad interno.
4. Buffer de reacción.
5. Sustrato. p-Nitrofenil fosfato
6. Agua bidestilada

Referencias:

Ezequiel Jorge Alba Posse, Carolina González, Pedro Carriquiriborde, Alejandro Nadra, Javier Gasulla. "Optimization and validation of a protein phosphatase inhibition assay for accessible microcystin detection".Talanta, Volume 255, 2023, 124174, ISSN 0039-9140, https://doi.org/10.1016/j.talanta.2022.124174. (https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0039914022009705)

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